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在线生物样品处理与 LC-MS/MS 联用新技术

2020-06-19 09:11 出处:未知 人气: 评论(0
  关键词:生物样品处理;LC-MS/MS;固相萃取技术;固相微萃取技术;柱切换技术;限进填料技术;分子印迹固相萃取技术;微透析技术
 
  1在线生物样品处理新技术概况
 
  生物样品预处理是体内药物分析中的一个重要环节,也是分析中最困难、最繁琐的工作。在体内药物分析中,生物样品成分复杂,除被测组分外,往往含有大量内源性物质、代谢产物及共存药物等干扰物质,且被测组分的含量很低,要准确地测定生物样品中的药物浓度,必须除去妨碍测定的杂质,对样品进行预处理[1]。根据生物样品的种类、所用的测定手段、被测药物的种类及浓度等不同,预处理方法各异。理想的样品处理和制备技术应是能最大限度地去除干扰被测组分的物质,少用或不用有机溶剂,回收率高,分析成本低,易操作,分析效率高,选择性高和适合于宽范围样品的分离[2]。近年来,随着药物分析技术的不断提高,生物样品预处理技术得到迅速发展,出现了不少液相色谱-质谱(LC-MS/MS)在线联用的新方法、新技术,如固相萃取技术、限进填料技术、分子印迹固相萃取技术与微透析等。这些在线生物样品处理技术与LC-MS/MS联用大大提高了样品的通量,克服了传统样品处理技术的缺陷与不足,实现了在线自动快速高效分析目标化合物,使其逐渐在体内药物分析领域得到广泛应用。
 
  2在线生物样品处理新技术的发展
 
  在体内药物分析领域,生物样品成分复杂,且被测组分的含量往往处于ng~pg级甚至更低水平,大多现有的分离分析技术尚不能对这样的复杂体系直接进行检测,生物样品中的药物必须经过分离、纯化、富集,必要时还需对待测组分进行化学改性处理。因此,样品的预处理就显得尤为关键,它通常是整个分离分析过程中最为繁琐的一个环节。而在很长一段时间,生物样品处理是体内药物分析领域相对忽视的一部分:通常情况下,生物样品制备由多级手工操作程序(如传统的蛋白质沉淀、液液萃取法)来完成,而分析程序中的其他部分如分离和检测技术(如HPLC、MS),已经得到了长足的发展。传统的生物样品处理方式如蛋白质沉淀、离心和过滤、液液萃取等虽还在广泛使用,但这些方法存在很多不足,如需大量试剂,成本过高,样品处理步骤复杂,耗费时间、人力,样品回收率、精密度不理想,且样品易损失等。它们不利于在线处理,实现自动化,或需要消耗大量有毒试剂,不利于环保和操作人员的身体健康。如作为样品制备的蛋白质沉淀法,常使提取的样品产生高基质效应和显著的信号抑制,测定的灵敏度和准确度不高。液液萃取法通常需要极性大的溶剂或混合溶剂,这往往会导致乳化现象的产生。乳化往往引起药物的损失,从而导致较低的回收率,特别是对于极性大的分析物如药物结合物与代谢产物,其回收率和样品纯度均不理想[3]。另外,有机溶剂易挥发、有毒性、污染环境及不能实现自动化也是该法的不足之处。事实上,这些传统的离线样品处理方法,制约了整个样品分析过程,已逐渐成为限制体内药物分析发展的瓶颈。因此,近年来生物样品处理技术已经引起了越来越多的关注与重视,对在线自动化分析的新方法和新技术的需求日益迫切。这无疑是对样本处理技术态度的重大转变:先前通常把样品制备作为分析之前的一个单独的程序,如今它已成为整个综合分析过程的一部分。为使样品制备技术满足、适应体内药物分析的需求,对其制备过程中涉及的不同方法与技术应进行优化与发展,而这一发展的关键是在线样品处理。事实上,这是一个以样品制备一体化为前提的综合分析系统,这一分析系统不同部分的匹配整合将使整体分析性能如准确度、精密度、灵敏度、选择性、流通量得到极大提高。因此先后产生了一系列样品处理技术如固相萃取技术、固相微萃取技术、柱切换技术、限进填料技术、分子印迹固相萃取技术与微透析等新技术,这些新方法与新技术克服了传统样品处理技术的缺陷与不足,极大提高了样品分析速度与准确度。将这些新技术与LC-MS联用是体内药物分析领域的一场重大革命,极大推动了体内药物分析的发展,已成为体内药物分析领域中应用广泛、高效、快速的在线样品处理分析联用技术。一方面,生物样品基质组成复杂,其中的脂肪、蛋白质、不溶性颗粒等杂质可污染分析仪器,使仪器耐受性和重现性下降。如对于一些富含蛋白质的体液(如血浆、血清等),一般不能采用LC-MS/MS法直接进样,因蛋白质与流动相的有机溶剂会发生相互作用,使色谱柱堵塞和劣化,还可能污染分析系统,产生离子抑制效应而使检测灵敏度下降[4]。预处理可以改善分析结果的准确度和精密度,可以延长色谱柱的寿命,改善选择性、组分的可测性及色谱行为。故生物样品的预处理是采用LC-MS分析系统必不可少的操作步骤。另一方面,LC-MS/MS联用技术作为当代最重要的分离和鉴定方法之一,它是以LC为分离手段,MS为检测器的一门综合性分析技术,集LC的高分离能力与MS的高灵敏度、极强的定性专属特异性于一体,体现了色谱和质谱优势的互补,组成了较完善的现代分析技术。正是由于LC-MS/MS法具有高度的专属性,对多数药物的检测灵敏度超过其他分析方法,使定量测定速度显著加快,弥补了传统LC检测器的不足,可以对混合物中的微量组分进行结构分析,适应了现代体内药物分析研究中高通量和高精度的要求,无疑已经成为药物动力学和代谢研究的核心分析技术。因此,在线样品处理技术与LC-MS联用,使生物样品的体内药物分析向着低污染、小型化、高选择性、高通量、自动化与在线化的方向发展。
 
  3在线生物样品处理新技术简介
 
  3.1固相萃取技术
 
  固相萃取(solid phase extraction,SPE)技术是建立在液-固相色谱理论基础上的一种分离、纯化方法。其基本原理是样品在固相(吸附剂)和液相(溶剂)之间的分配。保留或洗脱的机制取决于被分析物与吸附剂表面的活性基团,以及被分析物与液相之间的分子间作用力。有2种洗脱模式,一种是被分析物比所存在的生物介质与固相之间的亲和力更强,因而被保留,然后用一种对被分析物亲和力更强的溶剂洗脱;另一种是存在的生物介质较被分析物与固相之间亲和力更强,则被分析物被直接洗脱[5]。通常使用更多的是前一种洗脱模式的SPE。1971年,Broich JR等[6]首次将该技术用于尿液中滥用药物的提取。与传统的液液萃取法(LLE)比较,SPE具有明显的优势,首先,在LLE中,会发生乳化现象而严重影响结果的重现性,而在SPE中则不存在类似问题;其次,LLE的另一个主要缺点是回收率的高低在很大程度上取决于操作人员,对同样一个方法,不同操作者所得到的结果可能差异很大,而SPE是基于待测分析物官能团和SPE柱固相填料的官能团之间的作用力将待测分析物萃取出来的,其方法重现性好,很容易在实验室之间传递,有利于实现标准化。SPE另一个最突出的优点是操作简单,便于自动化;此外,固相萃取法还具有选择性强、分离时间短、富集倍数高、较高的精密度与准确度和有机溶剂的低消耗等突出的优点。Ferreiro-Veraa C等[7]运用SPE-LC-MS/MS联用技术对人体血清中前列素的含量进行了测定,结果显示此方法具有良好的准确度、精密度及回收率。与蛋白质沉淀及液液萃取法相比,该方法克服了手工操作、代谢产物易降解、目标分析物易损失等缺点。但该方法也存在一些缺点,如价格昂贵、技术要求高、批与批之间存在差异、柱子易阻塞等,这在一定程度上限制了固相萃取的应用。
 
  SPE与色谱技术的联用实现了样品预处理及分离分析的优化组合,特别是SPE-LC-MS/MS成为当前研究较多的一项生物样品在线处理联用技术,与传统的蛋白质沉淀及液液萃取法相比,大大提高了萃取效率,减少了操作者与有毒试剂接触的机会,缩短了分析时间,并适用于生物样品的实时自动化连续检测。Naxing XR等[8]采用在线SPE-HPLC-MS/MS耦合法测定了人血浆中的安普那韦和阿扎那韦。这一方法结合了基于单片材料的高流通量在线提取方法和窄口径的高分离率、高灵敏度的分析柱。在使用相同的单片材料萃取柱,超过450次血浆注射的情况下仍具有较好的重复性和可靠的定量数据,且这一方法具有低后遗效应、高回收率、不受基质影响等特点。Wang Q等[9]运用在线SPE-LC-ESI-MS法自动快速测定了犬和人血浆中的葛根素含量,该方法允许血浆样品直接进样柱切换LC系统,这一过程由软件控制实现了自动化,单次分析只需6.5 min。此方法具有良好的特异性、线性、灵敏度和精密度,成为葛根素药物动力学研究中各种生物样品的处理方法。目前,在线SPE-LC-MS联用技术已广泛用于复杂生物基质如血浆[10-11]、全血[12]、唾液[13]、血清[13-14]、尿液[15]等的分析。
 
  3.2固相微萃取技术
 
  固相微萃取技术(solid phase microextraction,SPME)是一种相对较新型的样品预处理技术,是由加拿大Waterloo大学Pawliszyn研究小组于1990年首创[16]。该技术是由固相萃取技术发展而来:基于液-固吸附平衡的原理,利用待测物对活性固体表面有一定的吸附亲和力而达到分离富集的目的。在一根熔融的石英纤维表面涂渍各种不同的色谱固定相或吸附材料构成萃取头,选择性的富集样品中的痕量有机化合物。美国Supelco公司于1993年推出了商品化的SPME装置,在分析化学领域引起了极大的反响。SPME技术集采样、萃取、浓集、进样于一体,避免引入多步操作误差;样品量小,无需萃取溶剂;萃取选择性高,适用于分析挥发性和非挥发性物质。运用SPME法与传统的血浆蛋白沉淀法分别分析全血中的非诺特罗及苯二氮杂类药物进行药物代谢动力学研究,获得了相似结果,2种方法之间的相关系数为0.97~0.99[17-18]。运用SPME与微透析技术对绿色植物叶片中目标分析物进行采样分析[19],结果显示这2种方法具有相似的检测限和定量限,表明SPME具有与体内微透析技术相似的分析性能。此外,SPME技术具有额外的优势:无需泵或电源供应器;更适合实地采样,具有良好的稳定性[20];但这并不表明该方法已经完善,由于SPME所使用固相涂层种类有限,限制了它的应用范围和联用技术。
 
  SPME技术应用于挥发性和半挥发性物质的自动化分析始于1992年,即Arthur CL运用Varian型8100自动进样器对苯、甲苯、乙苯和二甲苯进行自动化分析[21]。随后,生产商开发了许多针对自动化固相微萃取技术的商业化自动进样器,实现了从不同基质中进行串行提取和解吸附,然后直接GC进样作进一步分析[22]。多年来已经在环境、食品、临床领域建立了自动SPME-GC联用的方法分析挥发和半挥发物质。1997年Eisert R[23]等首次运用自动化SPME-LC联用技术分析半挥发和非挥发性物质,该方法使用改进的内嵌吸附材料的HPLC自动进样器,样品在吸附材料上进行吸附和解吸附,随后流动相将分析物洗脱至分析柱进行色谱分离和进一步分析。Kataoka H等[24]运用该方法同时测定了生物基质中的安非他命(兴奋剂)和β受体阻滞剂。Yang R等[25]使用固相微萃取膜技术与LC-MS联用的方法测定生物样品中大麻酚类的含量。随后,这一方法被逐渐开始用于对复杂生物基质如毛发[26]、血浆[27-29]、尿液[28,30]和唾液[31-32]的分析。
 
  3.3柱切换技术
 
  柱切换(column switching)最早由Snyder于1970年提出,是指能够由阀来改变流动相走向与流动相系统,从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入分析柱的技术。近十年来发展迅速,成为一种日益普及的高通量生物样品分析方法,被广泛应用于分析的各个领域,如环境保护、农药残留监测、食品检验、生化分析、体内药物分析等[33]。作为一种快速、稳定性好的分析方法,其简化了样品处理过程,避免了传统处理技术的缺点。具有较高的色谱分辨率及选择性;可富集微量组分,在一个色谱网络中达到多个分离目标;可在线衍生化,提高检测灵敏度及衍生化重现性;在线净化样品,使预处理自动化。但柱切换技术进行复杂样品分析时,经常会遇到一些问题:系统峰的干扰、峰展宽、回收率低;另外,柱切换技术还存在设备要求高(需附加阀、色谱柱、泵等设备)以及2次进样间相互干扰等问题[34]。
 
  采用柱切换与LC-MS/MS联用技术,在以水为主的预处理流动相的引导下,可使大体积的体液样品直接进入预处理柱,在水的冲洗下可除去蛋白质和一些极性内源性杂质,被测组分则保留在预处理柱上,得到净化和浓缩,然后切换,以分析流动相将被测组分从预处理柱冲至分析柱,进行再分离与质谱测定,实现了在线自动化快速高效分析生物样品中的目标化合物,已广泛应用于复杂生物基质如毛发[35-36]、血清[37]、尿液[37]、肝微粒体[38]、血浆[39]、脑组织[40]等的分析。
 
  Borrey D等[41]利用柱切换LC-MS/MS联用技术定量测定了人血清中睾酮,其结果与传统方法(液液萃取-放射免疫分析法)的相关性为r2=0.920,表明柱切换技术提供了一种测定人血清中睾酮的简单、快速、经济分析方法。Ansermot N等[42]利用柱切换液相色谱-电喷雾质谱法(LC-ESI-MS)对外周血单核细胞中的环孢素A进行定量分析。该分析方法在5~400 ng·mL-1方法学验证结果良好,这使得测量细胞中微量的环孢素A成为可能。
 
  3.4限进填料技术
 
  限进填料(restricted access media,RAM)也称限制进入固定相,这一概念由Desilets CP等[43]于1991年首先提出,是一种专门去除生物基质中内源性大分子物质的多孔排阻色谱填料,利用尺寸排阻原理,适合于生物基质中小分子物质的处理。根据吸附剂的结构和性质可分为5种类型[44]:内表面反相填料(ISRP)、半渗透表面填料(SPS)、屏蔽疏水相填料(SHP)、蛋白涂覆C18硅胶填料(ODS)、混合功能填料。这些材料具有特殊的结构:外表面涂覆各种亲水性的基团(如甲基纤维素、二醇基等),利用尺寸排阻原理,使蛋白质等生物大分子不被保留,排入废液中;内表面键合有各种功能团,包括常规的具有反相色谱性能的烷基链(如C4、C8、C18等)以及离子交换基团。小分子分析物渗透进入内表面后由于疏水作用而被保留,从而达到去除生物大分子等基质成分,保留分析物的目的。与传统的固相萃取法相比,RAM材料可选择性保留小分子物质,去除大分子物质如蛋白质等基质成分,消除其对目标分析物分离和检测时的干扰。但该方法仍然存在对样品富集倍数低,选择性差的不足。因此,尚需要开展新型RAM材料的研究。
 
  传统的生物样品处理方法如蛋白质沉淀、液液萃取经常费力费时且相对重现性差,这些繁琐的生物样品处理过程已成为生物样品分析的瓶颈,限制了高通量分析的发展[45]。此外,离线样品处理往往会导致样品损失或污染[46]。为发展自动化与高通量样品处理技术,已有很多人做了不懈的努力。将RAM技术与柱切换高效液相色谱法联用可实现自动化分析,这种方法被广泛应用并成功用于分析复杂生物基质中药物分子如消炎痛[47]、1-羟基芘[48]等物质。但对于生物基质中的痕量目标分析物,需要更为灵敏和准确的分析方法。20世纪90年代初,基于大气压电离技术的质谱仪的大规模引进,其与液相色谱的联用推动了RAM材料朝高通量分析方向的发展。RAM技术与LC-MS/MS的联用实现了在线快速、灵敏分析生物样品中的目标化合物如地西泮[49]、醋酸环丙孕酮[50]等,满足了这一分析趋势的要求,成为一种很有前景的快速灵敏测定生物样品基质中目标分析物的方法。Amini N等[51]利用RAM-SPE-LC-MS/MS在线技术快速直接同时测定了人体血浆中的8种有机磷三酯,这一方法使用了柱切换技术,分析物富集在RAM柱上,然后用C分析柱分离,LC-MS系统测定。Papp R等[52]以C RAM-ADS为萃取柱,采用LC-MS法直接分析血浆中的小分子药物。该方法通过紫外检测器实时监测优化样品的负载速度和进样体积,在l~500 ng·mL-1时回收率达93%~110%,RSD<5%。
 
  3.5分子印迹固相萃取技术
 
  为准确识别和测定复杂基质中低浓度化合物,对生物样品预处理技术提出了更高的要求。以C8、C18等材料[53]为吸附剂的固相萃取法是一种完善的水样提纯和富集方法,但它往往缺乏对目标化合物的提取选择性。因此,基于高亲和性和选择性的分子识别材料如免疫吸附剂(利用抗体进行选择性提取和富集目标化合物)得以应用[54],但抗体的制备耗时且价格昂贵,这一弊端导致人工合成抗体即分子印迹聚合物的发展。分子印迹聚合物技术是从分子水平研究识别反应的化学概念,起源于诺贝尔奖获得者Pauling提出的以抗原为模板来合成抗体的“抗体形成”理论[55]。分子印迹聚合物是一种针对目标分子设计的具有特定空腔的特异性合成材料,对目标分析物具有高度亲和性和选择性,如同抗原-抗体、酶-底物、配体-受体作用一般,因此通常被称为合成受体或人造抗体[56-57]。其基本原理是当模板分子(印迹分子)与聚合物单体接触时会形成多重作用点,通过聚合物过程这种作用就会被记忆下来,当模板分子除去后,聚合物中就形成了与模板分子空间构型想匹配的具有多重作用点的空穴,这样的空穴将对模板分子及其类似物具有选择识别性。分子印迹聚合物与免疫吸附剂相比具有一定的优势,如较高的力学稳定性、耐高温高压、对强酸、强碱和有机溶剂显惰性、成本低、保质期长、具有良好的重复性。1994年Sellergren B等[58]首次将分子印迹聚合物与固相萃取技术结合起来,形成一种新的样品处理技术即分子印迹固相萃取技术,Sellergren使用分子印迹聚合物特异性在线富集尿液中的喷他咪。从此,分子印迹固相萃取技术作为一种十分有前景的方法广泛用于体内药物分析领域的生物样品处理,如尿液[59-60]、血浆[59-60]、血清[61]、细胞[60]等,关于这种技术的应用的报道日益增加。但该技术仍然不够完善,如其容量还不够大,富集倍数不够高;识别能力受上样溶剂的影响较大,在水溶液中选择性较差;分子印迹萃取剂的种类有限。
 
  分子印迹固相萃取技术与LC-MS联用极大地提高了固相萃取的选择性,简化了样品前处理过程,改善了分析方法的检测限和灵敏度。近年来,在环境样品分析、生物医学样品分析、农药残留检测以及药物分离提纯等方面有着广泛的应用。Mullett WM等[60]利用分子印迹固相萃取技术与LC-MS联用测定了人体尿液、血浆中维拉帕米及其代谢产物的含量。Shah KA等[62]运用分子印迹固相萃取技术与LC-MS/MS联用的方法,以微流体直接注射的方式分析人体尿液中的4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁醇。该方法在已有研究基础上得到优化,对基质效应进行了评估和解决。它允许微小体积尿液样品直接注入到填充MIP材料的微流体柱中,以实现快速高效分析。
 
  3.6微透析技术
 
  微透析(microdialysis,MD)是一种用于监测动物和人类细胞外液、组织、大脑活性物质的生理水平的活体取样技术。是在非平衡条件(即流出的透析液中待测化合物的浓度低于它在探针膜周围样品基质中浓度)下,灌注植入组织中的微透析探针,组织中待测化合物沿浓度梯度逆向扩散进入透析液,被连续不断地带出,从而达到从活体组织中取样的目的。该技术诞生于20世纪60年代[63],最初应用于研究脑脊髓液化学环境,自90年代起在体内药物分析领域中应用逐渐广泛、深入。与SPE、LLE法相比,微透析技术简单、快速、无溶剂消耗且可获得同样的灵敏度。
 
  微透析不仅可与分离技术如高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳(CE)等联用,还能与检测系统如质谱测定(MS)、放射免疫测定(RIA)、电化学检测(ECD)、荧光检测等联用。但与其他联用技术相比,液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术是目前普遍适用于与MD结合进行分离、分析的技术。近年来,微透析技术与LC-MS联用在药学、生物学、临床医学等领域得到了广泛的应用,特别是在体内药物分析领域对复杂生物基质如全血[64-65]、脑组织[64,66-67]、胆汁[65]、皮肤[68]等的分析。Guo P等[69]采用微透析与LC-MS/MS联用技术分析抗癌药物甲氨蝶呤及其代谢产物7-羟基甲氨蝶呤在小鼠血浆及脑组织中的药动学参数。该方法需要样品量少,迅速。
 
  尽管MD与LC-MS联用有许多优点,如活体取样、动态观察、在线定量分析、采样量小、组织损伤轻,时间节点的可选择性等,避免了传统药物研究中处死动物,同时可以对同一动物收集大量的样本进行分析。但也有其不足之处,如探针回收率的好坏一直是微透析技术面临的首要问题;对微透析探针校正和对微透析取样获得的少量样品的分析方法要求也是需要继续研究的问题。
 
  4结语
 
  近年来,体内药物分析生物样品的预处理和测定的新方法、新技术不断兴起,使得从样品的采集、处理、分离到检测完全自动化成为了现实。在线样品处理技术与LC-MS联用技术在复杂生物基质中的定性和定量分析中发挥了巨大的作用。未来的体内药物分析的发展方向将是高通量化、微量化、在线化、复杂生物基质中的痕量分析。为满足、适应体内药物分析日益发展的需求,样品预处理技术仍需进一步优化与发展。
 
  参考文献
 
  [1]李好枝.体内药物分析[M].2版.北京:中国医药科技出版社,2011:82-84.
 
  [2]周丽华.体内药物分析测定前样品处理以及测定的基本程序[J].内蒙古中医药,2013,(1):116-118.
 
  [3]Abdel-Rehim M.Microextraction by packed sorbent(MEPS):a tutorial[J].Anal Chim Acta,2011,701(2):119-128.
 
  [4]Guo J,Zhao Y,Zhao L,et al.Simultaneous quantification ofCTN986 and its deglycosylation products in rat serum using liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J].Rapid CommunMass Spectrom,2006,20(11):1701-1708.
 
  [5]庄苒.固相萃取技术及其在体内药物分析中的应用[J].海峡药学,2007,19(8):115-118.
 
  [6]Broich JR,Hoffman DB,Goldner SJ,et al.Liquid-solid ext-raction of lyophilized biological material for forensic analysis.I.Application to urine samples for detection of drugs of abuse[J].JChromatogr,1971,63(2):309-312.
 
  [7]Ferreiro-Vera C,Mata-Granados JM,Priego-Capote F,et al.Automated method for targeting analysis of prostanoids in human
 
  serum by on-line solid-phase extraction and liquid chromatography-mass spectrometry in selected reaction monitoring[J].J Chromato-
 
  gr A,2011,1218(20):2848-2855.
 
  [8]Naxing XR,Fan L,Kim GE,et al.A monolithic-phase based on-line extraction approach for determination of pharmaceutical
 
  components in human plasma by HPLC-MS/MS and a comparison with liquid-liquid extraction[J].J Pharm Biomed Anal,2006,40(3):728-736.
 
  [9]Wang Q,Li X,Dai S,et al.Quantification of puerarin in plasma by on-line solid-phase extraction column switching liquid chroma-
 
  tography-tandem mass spectrometry and its applications to a phar-macokinetic study[J].J Chromatogr B:Analyt Technol BiomedLife Sci,2008,863(1):55-63.
 
  [10]Wang CJ,Yang NH,Chang CC,et al.Rapid and simple one-step membrane extraction for the determination of 8-hydroxy-2’-deoxyguanosine in human plasma by a combination of on-line solidphase extraction and LC-MS/MS[J].J Chromatogr B:Analyt Technol Biomed Life Sci,2011,879(30):3538-3543.
 
  [11]Inoue K,Ikemura A,Tsuruta Y,et al.On-line solid-phase ext-raction LC-MS/MS for the determination of Ac-SDKP peptide in human plasma from hemodialysis patients[J].Biomed Chromato-gr,2012,26(2):137-141.
 
  [12]Emotte C,Deglave F,Heudi O,et al.Fast simultaneous quanti-tative analysis of FTY720 and its metabolite FTY720-P in human
 
  blood by on-line solid phase extraction coupled with liquid chroma-tography-tandem mass spectrometry[J].J Pharm Biomed Anal,2012,58:102-112.
 
  [13]Ruiter AF,Teeninga N,Nauta J,et al.Determination of unbound prednisolone,prednisone and cortisol in human serum and saliva by on-line solid-phase extraction liquid chromatography tandemmass spectrometry and potential implications for drug monitoring of prednisolone and prednisone in saliva[J].Biomed Chromatogr,2012,26(7):789-796.
 
  [14]Emotte C,Heudi O,Deglave F,et al.Validation of an on-line solid-phase extraction method coupled to liquid chromatography-tandem mass spectrometry detection for the determination of In-dacaterol in human serum[J].J Chromatogr B:Analyt Technol Biomed Life Sci,2012,895-896:1-9.
 
  [15]Leon-Gonzalez Z,Ferreiro-Vera C,Priego-Capote F,et al.Tar-geting metabolomics analysis of the sunscreen agent 2-ethylhexyl 4-
 
  (N,N-dimethylamino)benzoate in human urine by automated on-line solid-phase extraction-liquid chromatography-tandem mass
 
  spectrometry with liquid chromatography-time-of-flight/mass spec-trometry confirmation[J].J Chromatogr A,2011,1218(20):3013-3021.
 
  [16]Arthur CL,Pawliszyn J.Solid phase microextraction with thermal desorption using fused silica optical fibers[J].Anal Chem,1990,62(19):2145-2148.
 
  [17]Musteata FM,Musteata ML,Pawliszyn J.Fast in vivo microext-raction:a new tool for clinical analysis[J].Clin Chem,2006,52(4):708-715.
 
  [18]Musteata FM,de Lannoy I,Gien B,et al.Blood sampling wit-hout blood draws for in vivo pharmacokinetic studies in rats[J].J Pharm Biomed Anal,2008,47(4-5):907-912.
 
  [19]Zhou SN,Ouyang G,Pawliszyn J.Comparison of microdialysiswith solid-phase microextraction for in vitro and in vivo studies[J].J Chromatogr A,2008,1196-1197:46-56.
 
  [20]Zhou SN,Oakes KD,Servos MR,et al.Application of solid-phase microextraction for in vivo laboratory and field sampling of pharmaceuticals in fish[J].Environ Sci Technol,2008,42(16):6073-6079.
 
  [21]Catherine L,Arthur,Lisa M,et al.Automation and optimization of solid-phase microextraction[J].Anal Chem,1992,64(17):1960-1966.
 
  [22]O’Reilly J,Wang Q,Setkova L,et al.Automation of solid-phase microextraction[J].Journal of Separation Science,2005,28(15):2010-2022.
 
  [23]Eisert R,Pawliszyn J.Automated in-tube solid-phase microextrac-tion coupled to high-performance liquid chromatography[J].Anal Chem,1997,69(16):3140-3147.
 
  [24]Kataoka H,Lord HL,Yamamoto S,et al.Development of auto-mated in-tube SPME/LC/MS method for drug analysis[J].J Micro-column Sep,2000,12(9):493-500.
 
  [25]Yang R,Xie W.Determination of cannabinoids in biological sam-ples using a new solid phase micro-extraction membrane and liquid chromatography-mass spectrometry[J].Forensic Sci Int,2006,162(1-3):135-139.
 
  [26]Kataoka H,Inoue T,Saito K,et al.Analysis of heterocyclic amines in hair by on-line in-tube solid-phase microextraction coup-led with liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Anal Chim Acta,2013,786:54-60.
 
  [27]Bojko B,Vuckovic D,Cudjoe E,et al.Determination of tranex-amic acid concentration by solid phase microextraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry:first step to in vivoanalysis[J].J Chromatogr B:Analyt Technol Biomed Life Sci,2011,879(32):3781-3787.
 
  [28]Zheng MM,Wang ST,Hu WK,et al.In-tube solid-phase mi-croextraction based on hybrid silica monolith coupled to liquidchromatography-mass spectrometry for automated analysis of ten antidepressants in human urine and plasma[J].J Chromatogr A,2010,1217(48):7493-7501.
 
  [29]Xie W,Mullett WM,Miller-Stein CM,et al.Automation of in-tip solid-phase microextraction in 96-well format for the deter-mination of a model drug compound in human plasma by liquid chromatography with tandem mass spectrometric detection[J].JChromatogr B:Analyt Technol Biomed Life Sci,2009,877(4):415-420.
 
  [30]Zhan Y,Musteata FM,Basset FA,et al.Determination of free and deconjugated testosterone and epitestosterone in urine using SPME and LC-MS/MS[J].Bioanalysis,2011,3(1):23-30.
 
  [31]Kataoka H,Ehara K,Yasuhara R,et al.Simultaneous determi-nation of testosterone,cortisol,and dehydroepiandrosterone in saliva by stable isotope dilution on-line in-tube solid-phase micro-extraction coupled with liquid chromatography-tandem mass spec-trometry[J].Anal Bioanal Chem,2013,405(1):331-340.
 
  [32]Bessonneau V,Bojko B,Pawliszyn J.Analysis of human salivametabolome by direct immersion solid-phase microextraction LC and benchtop orbitrap MS[J].Bioanalysis,2013,5(7):783-792.
 
  [33]顾云.柱切换HPLC技术在生物样品测定中的应用[J].天津药学,2003,15(3):80-82.
 
  [34]潘震宇,李威,肖轶雯,等.全自动驻切换高效液相色谱系统测定人血浆中奥卡西平的浓度[J].中南药学,2012,10(12):881-884.
 
  [35]Alves MN,Zanchetti G,Piccinotti A,et al.Erratum to:Determi-nation of cocaine and metabolites in hair by column-switching LC-MS-MS analysis[J].Anal Bioanal Chem,2013,405(23):7553.
 
  [36]Alves MN,Zanchetti G,Piccinotti A,et al.Determination ofcocaine and metabolites in hair by column-switching LC-MS-MS analysis[J].Anal Bioanal Chem,2013,405(19):6299-6306.
 
  [37]Jeong JY,Lee JH,Kim EY,et al.Determination of PhthalateMetabolites in Human Serum and Urine as Biomarkers for Phthala-te Exposure Using Column-Switching LC-MS/MS[J].Saf Health Work,2011,2(1):57-64.
 
  [38]Behera D,Pattem R,Kumar MS,et al.Utility of a column-switching LC/MS/MS method in cytochrome P450 inhibition assays using human liver microsomes[J].Drug Metabol Drug Interact,2013,28(3):177-185.
 
  [39]Wickremsinhe ER,Lee LB,Schmalz CA,et al.High sensiti-ve assay employing column switching chromatography to enablesimultaneous quantification of an amide prodrug of gemcitabine(LY2334737),gemcitabine,and its metabolite dFdU in human plasma by LC-MS/MS[J].J Chromatogr B:Analyt Technol Bio-med Life Sci,2013,932:117-122.
 
  [40]Zheng Q,Wang F,Li H,et al.Quantitative analysis of olanza-pine in rat brain microdialysates by HPLC-MS/MS coupled with column-switching technique[J].J Chromatogr B:Analyt TechnolBiomed Life Sci,2012,905:127-132.
 
  [41]Borrey D,Moerman E,Cockx A,et al.Column-switching LC-MS/MS analysis for quantitative determination of testosterone in human serum[J].Clin Chim Acta,2007,382(1-2):134-137.
 
  [42]Ansermot N,Fathi M,Veuthey JL,et al.Quantification ofcyclosporine A in peripheral blood mononuclear cells by liquid chromatography-electrospray mass spectrometry using a column-switching approach[J].J Chromatogr B:Analyt Technol BiomedLife Sci,2007,857(1):92-99.
 
  [43]Desilets CP,Rounds MA,Regnier FE.Semipermeable-surface reversed-phase media for high-performance liquid chromatography[J].J Chromatogr,1991,544(1-2):25-39.
 
  [44]Sadílek P,ŠatínskýD,Solich P.Using restricted-access mate-rials and column switching in high-performance liquid chroma-tography for direct analysis of biologically-active compounds incomplex matrices[J].TrAC Trends in Analytical Chemistry,2007,26(5):375-384.
 
  [45]Ehrlich M,Trittler R,Daschner FD,et al.A new and rapid me-thod for monitoring the new oxazolidinone antibiotic linezolid in se-rum and urine by high performance liquid chromatography-integrated
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