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大叶钩藤的药学实验分析

2020-04-17 11:16 出处:未知 人气: 评论(0
  摘要:[目的]对大叶钩藤进行药学实验分析研究。[方法]采集大叶钩藤药材标本,分别采用不同实验方法对叶片主脉及叶肉组织结构、叶面气孔及表皮细胞形态、大叶钩藤中生物碱、大叶钩藤不同部位有效成分一一进行分析。[结果]大叶钩藤叶形状鉴别以及显微特征分析中,发现均有明显的形态学规律,能够作为生物药学鉴定资料。大叶钩藤中钩藤碱与异钩藤碱范围在0.02g~5g时具有较好的线性关系。[结论]大叶钩藤的形态较为明显,具有进一步开发利用的价值。
 
  关键词:大叶钩藤;药学;药学实验
 
  中医认为,钩藤息风定惊,清热平肝,在中枢神经等方面具有一定治疗价值。以往对钩藤的药物价值主要看重其带钩茎枝,对钩藤藤茎、钩的研究较多。近年来调查分析及化学研究发现其叶片也具有入药价值,但关注度和开发利用均较低,缺乏系统的药学研究,造成钩藤药用资源的浪费。本文主要通过生化学实验对大叶钩藤的药学价值进行研究。
 
  一、资料与方法
 
  (一)材料与研究仪器
 
  钩藤标本来自广东,经福州市药品检验所鉴定为大叶钩藤。研究所采用仪器有:切片机、生物显微镜、数码相机、超声波清洗仪、电子天平,以及旋转蒸发仪、薄层色谱成像系统等。
 
  (二)方法
 
  对大叶钩藤药材标本加以采集,鉴别钩藤叶的性状;在显微镜下观察大叶钩藤石蜡切片,重点观察其叶片主脉以及叶肉组织结构;叶面气孔以及表皮细胞形态则采用表面撕片法进行观察分析;应用生物碱沉淀反应和硅胶薄层层析色谱等理化鉴别法,分析和比较大叶钩藤中生物碱;通过用HPLC法对大叶钩藤不同部位有效成分进行测定。
 
  大叶钩藤生物碱含量测定步骤:采用美国戴安公司的高效液相色谱仪;分别精密称取钩藤碱、异钩藤碱对照品各5.00mg,于10ml棕色容量瓶中,分别用流动相溶解、定容,摇匀;分别精确称量大叶钩藤带钩茎枝粗粉、叶粗粉各一份,并分别在将其浸润在浓氨水中,加入20倍的无水乙醇,过夜后经2次超声提取,过滤杂质并水浴蒸干,用乙醚多次萃取,直到醚层没有颜色,将其水浴蒸干之后,用流动相溶解定容于10ml容量瓶中。分别吸取两溶液,注入色谱仪,进行测定。
 
  (三)统计学处理
 
  本次研究数据统计学处理软件为SPSS21.0,检验水准为=0.05。
 
  二、结果
 
  (一)大叶钩藤叶相对其他钩藤叶面较大,叶片表面呈皱缩样,隆起呈浅波状。大叶钩藤完整叶片展开后为卵形或阔椭圆形,叶革质。叶片长10~16cm,宽6~12cm,叶片由基部到顶端越来越尖。叶片标本上、下表面分别呈现灰绿色与浅绿色,上表皮相对较光滑,只是在脉上披黄褐色毛,下表面均披褐色硬毛且脉上毛较密。气微,味微苦。
 
  显微鉴别下大叶钩藤叶横切面上下表皮各为1列细胞,单细胞非腺毛有时可见。叶片上表皮细胞比下表皮细胞厚,大约是其2倍,形状多为方形或扁方形。其中单细胞非腺毛较多,有2-3列的栅栏组织细胞,第1列细胞长约40mm、直径5mm,排列紧密整齐,第2-3列细胞长20~23mm,相对稍短。在海绵组织上,大叶钩藤具有薄而紧密的特点,通过观察叶片可见其薄璧细胞中呈现出草酸钙簇晶。叶片下表面稀疏分布着平轴式气孔,气孔横向长12.5~17.5mm、纵向长20~27.5mm。下表皮细胞在垂周壁方面呈稍弯曲状,表皮上单细胞数量较多,非腺毛平直细长,长400~420μm,基部直径15~20μm。上表皮细胞整体呈方形,垂周壁将近平直。
 
  (二)生物碱沉淀反应显示,与碘化铋钾试液、碘化汞钾试液、硅钨酸试液混合试验时,不论是钩藤对照药材还是大叶钩藤叶样本都能与这些溶液产生沉淀,且在量上较多,沉淀过程中有明显的浑浊现象。薄层层析色谱分析结果显示,对照钩藤药材出现5个斑点,大叶钩藤有2个斑点与对照组药材的比移值相同,这就说明与钩藤对照药材相比,大叶钩藤具有相同的化学成分,且至少有两种。
 
  (三)通过美国戴安公司的高效液相色谱仪测
 
  定大叶钩藤生物碱含量。色谱条件:依利特Hyper-sil ODS C18柱(4.6 mm×200mm,5μm);柱温:室温;流动相:甲醇一水(含0.5%三乙胺,冰乙酸调pH6.3)=63:37,流速:0.8ml/min;检测波长:245nm;进样量:5.0μl。
 
  吸取大叶钩藤(带钩茎枝)样品溶液以及大叶钩藤(叶)样品溶液各5.0μl,并将其分别注入色谱仪后钩藤碱、异钩藤碱与其相邻峰达到良好的分离。(见图1、图2)
  大叶钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱范围在0.02g~5g时具有较好线性关系;其中大叶钩藤叶、大叶钩藤带钩茎枝中钩藤碱含量分别0.016%、0.015%,大叶钩藤叶、大叶钩藤带钩茎枝中异钩藤碱含量含量分别为0.006%、0.004%;钩藤碱平均回收率为98.5%,异钩藤碱平均回收率为99.1%。
 
  三、讨论
 
  钩藤作为一种中药入药时,带钩茎枝是其传统药用部位,去叶是钩藤传统的采收加工方法,通常会对带钩的枝茎进行修剪,长度大约3cm,其他部位则被认为是废料而丢弃。不过当前的研究均表明,大叶钩藤的叶片在总生物碱含量方面接近带钩茎枝,且在化学成分上大叶钩藤叶与钩相似。且钩藤带钩茎枝在产量上较少,而钩藤叶的资源产量却远远高出。作为一种药用资源,钩藤叶在来源上更加丰富,在综合利用上具有较大潜力,所以对钩藤叶药用价值的研究是十分必要的。
 
  本实验通过对大叶钩藤药材性状、显微结构、理化鉴别等观察和分析发现,与其他钩藤叶面面积相比,大叶钩藤明显较大,且叶片中呈现出较多的单细胞非腺毛。其中会有2~3列会出现栅栏组织细胞,叶片薄璧细胞中能够明显发现草酸钙簇晶,气孔为平轴式。在大叶钩藤中,存在多种生物碱,钩藤碱和异钩藤碱是其中主要的有效成分。通过HPLC法对大叶钩藤钩藤碱或异钩藤碱进行测定后发现,大叶钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱范围在0.02g~5g时具有较好的线性关系;其中大叶钩藤叶、大叶钩藤带钩茎枝中钩藤碱含量为0.016%、0.015%,大叶钩藤叶、大叶钩藤带钩茎枝中异钩藤碱含量分别为0.006%、0.004%。
 
  随着中药研究的越来越深入,人们对钩藤的药学及药理学认识越来越多。从整个研究结果来看,形态学规律在大叶钩藤性状及微特征方面比较明显,具有进一步开发利用的价值,应当物尽其用。
 
  [参考文献]
 
  [1]张鹏,黄瑞松,覃冬杰,等.钩藤药材中钩藤碱含量测定方法的建立[J].广西医科大学学报,2011,(1).
 
  [2]杨雅兰,阳志军,陆建林.大叶钩藤对自发性高血压大鼠血压和左心室肥厚影响的研究[J].中国现代医药杂志,2009,(4).
 
  [3]邓美彩,焦威,董玮玮,杨淳彬,鲁润华.钩藤化学成分的研究[J].天然产物研究与开发,2009,(2).
 
  [4]张秋翠,郭劲松.大叶钩藤有效成分的分离[J].中国中医药现代远程教育,2012,(2).
 
  [5]黄瑞松,覃冬杰,张鹏,黄必奎.广西不同产地和不同采收期大叶钩藤中钩藤碱定量分析[J].中草药,2012,(12).
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